搡bbbb搡bbb搡,军人全身脱精光自慰,粉嫩xxxx小馒头xxxx,在无限游戏里花式挨ch

您好!歡迎訪問北京東南儀誠電子產(chǎn)品維修有限公司網(wǎng)站!
全國服務(wù)咨詢熱線:

13071107068

當(dāng)前位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 數(shù)字PCR之“分”而治之微孔反應(yīng)體積穩(wěn)定性對DPCR定量結(jié)果的影響

數(shù)字PCR之“分”而治之微孔反應(yīng)體積穩(wěn)定性對DPCR定量結(jié)果的影響

更新時(shí)間:2022-10-12  |  點(diǎn)擊率:909

轉(zhuǎn)自羅氏診斷生命科學(xué)公眾號

  


大家好,本堂課我們繼續(xù)分析“分"而治之,談?wù)勎⒎磻?yīng)體積的穩(wěn)定性及準(zhǔn)確性對dPCR定量結(jié)果的影響。


dPCR檢測反應(yīng)體系中模板的拷貝數(shù)濃度是根據(jù)以下公式計(jì)算【1】:

Tc=?ln (1 ??p)/Vp

Tc:反應(yīng)體系中模板分子的拷貝數(shù)濃度(copy/µL)

p:陽性納米微孔的比例,Vp是微反應(yīng)的體積【2】。


如圖1所示,當(dāng)微反應(yīng)體積存在差異,而這種差異又被忽略的情況下,p值會偏低,導(dǎo)致dPCR的結(jié)果也偏低,尤其在整個(gè)反應(yīng)體積中模板濃度比較高的情況下,影響更大;反之當(dāng)原反應(yīng)體系中模板濃度足夠低,或者有足夠的微反應(yīng)數(shù)量能 每個(gè)納米孔的單分子占有率,微反應(yīng)體積偏差可以被忽略【3】。由此得知,微反應(yīng)體積是影響dPCR檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的又一重要因素。

 

圖1 納米微孔體積變化對分區(qū)間樣品分布的影響示意圖

(來源:羅氏診斷整理


如何控制微反應(yīng)的體積偏差,

dPCR檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性?


首先要選擇更穩(wěn)定的分區(qū)方式。

微反應(yīng)的形成主要有以下兩種方式:微滴式dPCR(ddPCR)和芯片式dPCR(dPCR)。

微滴式dPCR是將兩種互不相溶的液體的其中一種作為連續(xù)相(油),另外一種作為分散相(水),在水/油兩相表面張力和剪切力共同作用下分散相以微小體積單元的形式存在于連續(xù)相中,從而生成液滴實(shí)現(xiàn)多單元獨(dú) 擴(kuò)增。這種方式具有成本低,容易實(shí)現(xiàn)的優(yōu)點(diǎn),在早期推出的dPCR平臺上被廣泛應(yīng)用。但這種方式的局限性就在于微滴的均一性以及微滴之間的相互干擾直接影響微反應(yīng)單元的數(shù)量以及微滴體積的準(zhǔn)確判斷,即使是同類型的微滴發(fā)生器之間形成的微滴體積也會存在明顯差異【4】【5】。如果在分析的過程默認(rèn)微滴體積是個(gè)固定值,微滴式dPCR 定量結(jié)果與使用真實(shí)微滴體積計(jì)算的濃度之前有明顯差異【2】。



芯片式dPCR是通過芯片設(shè)計(jì)將納升液體封閉在高通量的微孔或微量通道中進(jìn)行后續(xù)的PCR擴(kuò)增及擴(kuò)增后結(jié)果的熒光判讀。芯片式dPCR生成的反應(yīng)微孔是物理分區(qū),體積均一,具有較高的穩(wěn)定性,體系之間影響較小, dPCR定量結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。



但上述兩種分區(qū)方式不論哪一種,微孔反應(yīng)體積的偏差都不容忽視【6】【7】,因?yàn)闃悠返那疤幚矸椒?、檢測反應(yīng)的體系等因素都會引起微孔反應(yīng)體積的差異。




因此, dPCR檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性的第二要素是監(jiān)控及校準(zhǔn)微反應(yīng)體積。

納米微孔的體積是影響dPCR檢測結(jié)果的一個(gè)關(guān)鍵因素,選擇合適的微反應(yīng)形成方式可以降低微反應(yīng)體積的偏差。但無論選擇哪種方式,實(shí)現(xiàn)對微反應(yīng)體積的監(jiān)測及校準(zhǔn)是 dPCR檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的重要因素。因此,dPCR平臺自帶微反應(yīng)體積監(jiān)測及校準(zhǔn)功能,才能有效把控微反應(yīng)體積對檢測結(jié)果的影響,從而 檢測的結(jié)果不受微孔體積偏差的影響。



dPCR技術(shù)優(yōu)勢已不需要再贅述,面對目前市場上眾多的平臺選擇,如何去篩選適合自身應(yīng)用的dPCR平臺是關(guān)鍵。



  






參考文獻(xiàn):

1. Standardization of nucleic acid tests for clinical measurements of bacteria and viruses. J Clin Microbiol. 2015; 53: 2008–14.

2. Droplet volume variability as a critical factor for accuracy of absolute quantification using droplet digital PCR. Analytical and Bioanalytical Chemistry volume 409, 2017; 6689–6697

3. Considerations for Digital PCR as an Accurate Molecular Diagnostic Tool Clin Chem, Volume 61, Issue 1, 1 January 2015; 79–88.

4. DNA copy number concentration measured by digital and droplet digital quantitative PCR using certified reference materials. Anal Bioanal Chem. 2015; 407:1831–40.

5. Method for measuring the volume of nominally 100 μm diameter spherical water-in-oil emulsion droplets. NIST Spec Publ. 2016; 260-184.

6. Evaluation of a droplet digital polymerase chain reaction format for DNA copy number quantification. Anal Chem 2012; 84:1003–11.

7. Single molecule detection in nanofluidic digital array enables accurate measurement of DNA copy number. Anal Bioanal Chem 2009; 394:457– 67.



掃一掃,關(guān)注微信
地址:北京市海淀區(qū)四季青杏石口路30號 傳真:
©2025 北京東南儀誠電子產(chǎn)品維修有限公司 版權(quán)所有 All Rights Reserved.  備案號:京ICP備2020036668號-1
国产草草影院ccyycom| 公的粗大挺进了我的密道| 邻居一晚让我高潮3次正常吗| 午夜不卡av免费| 成人漫画网站| 女性全捰艺术照摄影| 国产成人一区二区三区影院| 五十路○の豊満な肉体| 门卫老头吸允校花奶头| 午夜dj在线观看| 制服 中文 人妻 字幕| 与亲女洗澡时伦了视频| 久久精品国产亚洲av久| 69久久国产露脸精品国产| 大秦赋全集1-78集免费观看 | 久久久久久精品国产亚洲| 野外玩弄大乳孕妇| 国产亚洲精品麻豆一区二区| 奴役 支配 性狂虐 电击 极端| gogo全球高清大胆国模| 熟睡人妻被讨厌的公侵犯深田咏美| 精品一二三区久久aaa片| 亚洲 欧美 自拍 第15页| 精品一区二区三区在线视频| 变态另类重口特级| 国产麻豆一精品一av一免费| 丝袜老师你夹得好紧好爽| 18禁美女挤奶视频免费观看| 五十路六十路老熟妇a片| 国产无遮挡a片又黄又爽| 汤芳人体艺术| 久久鸭和久久丫是不是一个品牌| 亚洲av永久无码国产精品久久| 丰满多毛的大隂户乱| 隔壁人妻偷人bd中字| 把女邻居弄到潮喷的性经历| 无人区码一码二码W358CC| 亚洲av欧洲av人人爽爽软件| 嫩小bbb揉bbb揉bbbb| 国模杨依粉嫩蝴蝶150p| 偷玩熟睡醉酒体育壮男gv|